預(yù)包被 96 孔微孔板

標(biāo)準(zhǔn)

標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液

洗滌緩沖液

檢測(cè)試劑 A

檢測(cè)試劑 B

稀釋劑 A

稀釋劑 B

TMB 底物

停止解決方案

封板機(jī)

37°C 培養(yǎng)箱

多通道和單通道移液器以及無菌移液器吸頭

噴瓶或自動(dòng)洗板機(jī)

1.5 毫升管

蒸餾水

吸收性濾紙

100 ml 和 1 L 量筒

酶標(biāo)儀（波長(zhǎng)：450 nm）

ELISA 搖床

1） 標(biāo)準(zhǔn)品：用推薦體積的標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑緩沖液制備標(biāo)準(zhǔn)品，制成標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后按照方案中的說明，使用標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑緩沖液對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行連續(xù)稀釋。

2） 洗滌緩沖液：按照實(shí)驗(yàn)步驟中的說明，用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩沖液。

3） 檢測(cè)試劑制備：計(jì)算所需工作溶液的總體積。分別用稀釋劑 A 和稀釋劑 B 以 1：100 的比例稀釋檢測(cè)試劑 A 和檢測(cè)試劑 B。

1） 設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)、測(cè)試樣品和對(duì)照孔。

2） 將 100 μl 稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品分裝到標(biāo)準(zhǔn)孔中。

3） 將 100 μl 標(biāo)準(zhǔn)稀釋液緩沖液分裝到對(duì)照（零）孔中。

4） 將 100 μl 稀釋樣品分裝到樣品孔中。在 37 °C 下孵育 1 小時(shí)。

5） 將 100 μl 檢測(cè)試劑 A 分裝到每個(gè)孔中。在 37 °C 下孵育 1 小時(shí)。

6） 洗滌 3 次。

7） 將 100 μl 檢測(cè)試劑 B 分裝到每個(gè)孔中。在 37 °C 下孵育 30 分鐘。

8） 洗滌 5 次。

9） 將 90 μl TMB 底物分裝到每個(gè)孔中。在 37 °C 下孵育 10-20 分鐘。

10） 分裝 50 μl 終止液。

11） 測(cè)量 450 nm 處的 OD。

使用前，將試劑盒組分和樣品平衡至室溫 （18 - 25 °C）。建議為每個(gè)測(cè)試?yán)L制一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1. 在預(yù)涂板上分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)、測(cè)試樣品和對(duì)照（零）孔，然后記錄它們的位置。建議至少一式兩份測(cè)量每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品。

2. 將 100 μL 每種標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣品加入適當(dāng)?shù)目字小Ｓ蒙w子密封板，并在 37°C 下孵育 1 小時(shí)。

3. 取下蓋子，丟棄液體。

4. 向每個(gè)孔中加入 100 μl 檢測(cè)試劑 A 工作溶液。用蓋子密封板，并在 37°C 下孵育 1 小時(shí)。

5. 取下蓋子并丟棄溶液。用 1X 洗滌緩沖液洗滌板 3 次。

6. 向每個(gè)孔中加入 100 μL 檢測(cè)試劑 B 工作溶液，密封并在 37°C 下孵育 30 分鐘。

7. 棄去溶液，并按照上一步的說明用洗滌緩沖液洗滌板 5 次。

8. 將 90 μl TMB 底物分裝到每個(gè)孔中。用蓋子密封板，并在 37°C 下孵育 10-20 分鐘。避免暴露在光線下。孵育時(shí)間僅供參考，最佳時(shí)間應(yīng)由最終用戶決定。不要超過 30 分鐘。

9. 向每個(gè)孔中加入 50 μL 終止液。立即在 450 nm 處讀取。